血管内皮生长因子Ｃ及Ｐｏｄｏｐｌａｎｉｎ在人食管癌组织中的表达

[摘要] 目的 研究血管内皮生长因子C（VEGF-C）及Podoplanin在食管癌组织中的表达及意义。方法 取临床手术切除的50例食管癌组织，用免疫组化方法检测食管癌中VEGF-C及Podoplanin的表达情况。结果 在食管癌的癌细胞中可见VEGF-C阳性表达，阳性颗粒主要定位于肿瘤细胞胞浆内，并且进展期食管癌中VEGF-C表达明显高于早期，VEGF-C的表达与患者的性别、年龄无关（P＞0.05），而与有无淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。Podoplanin只表达于淋巴管内皮细胞，进展期食管癌组织微淋巴管密度（LMVD）明显高于早期食管癌组织（P＜0.01）。结论食管癌癌细胞VEGF-C的表达与肿瘤进展呈正相关，提示VEGF-C可促进食管癌组织淋巴管生成，从而引起癌细胞经淋巴道转移。Podoplanin可作为淋巴管的特异性标记物之一。

[关键词] VEGF-C；Podoplanin；食管鳞癌

[中图分类号] R735.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2009）12-05-02

VEGF-C and Podoplanin in Expressing of Esophageal Carcinoma Organization

JI Liang1 SHA Feng1 MA Wenhao2 XU Hao1 ZHANG Peng1YAO Lije1LI Yulan3JI Haibo3△HUANG Wei4△

1. Qiqihar Medical University Anthropology Institute，Heilongjiang 161006； 2. The First Stomatological Hospital of Qiqihar City，Heilongjiang 161006； 3. Haerbin Medical University Anthropology Institute， Haerbin 150086； 4. Qiqihar Medical University Grade-06，Heilongjiang 161006

[Abstract] Objective To Study the expression and clinical significance of VEGF-C and Podoplanin in esophageal carcinoma organizations. Methods Taking 50 examples esophageal carcinoma organizations of clinical surgery，and making use of immunohistochemistry measures to detect VEGF-C and podoplanin of esophageal carcinoma. Results Positive expression of VEGF-C can be found in cancer cell of esophageal carcinoma，positive particles lies mainly in ndochylema of tumour cell，further expression of VEGF-C obviously top the nonage in advanced esophageal carcinoma， expression of VEGF-C have nothing to do with gender and age（P＞0.05）， but was closely related to have the lymph node metastasis or not（P＜0.01）. Podoplanin is expressed only in lymph-vessel bast cell， the advanced time cancer of the esophagus progressing organizes obvious tiny lymph-vessel density（LMVD） cancer of the esophagus higher than early phase organization（P＜0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C in the esophagus cancer cell and tumour developing have positive relevance，that shows VEGF-C can promote the lymph-vessel generation in cancer of the esophagus organizes，so to bring cancer cell metastasis through the lymph-vessel.Podoplanin may be one of the lymphatic peculiarity markers.

[Key Words] VEGF-C；Podoplanin；Esophageal squamous cell carcinomas

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其最重要的转移途径是淋巴道转移，但是淋巴道转移的机制尚未完全清楚。因此，本文对食管癌组织中血管内皮生长因子C（Vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）及Podoplanin的表达进行研究，为防治食管癌淋巴道转移提供科学的理论基础，从而使其具有很高的实用价值。

1 材料与方法

1.1实验材料与试剂

取齐齐哈尔市第一医院2006~2008年经手术切除并证实为食管鳞癌的标本50例，其中早期22例，进展期28例；有淋巴结转移31例，无淋巴结转移19例；男性41例，女性9例；年龄最小35岁，最大82岁。

兔抗人VEGF-C多克隆抗体，兔抗人Podoplanin单克隆抗体，PV9000二步法免疫组化试剂盒均购自武汉博士得生物工程有限公司。

1.2实验方法

将食管癌标本在癌周边区取材，经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，石蜡切片机连续4μm厚度切片，免疫组化染色，DAB显色，苏木素复染，光学显微镜观察。

1.3统计学处理

采用SPSS13.0统计软件进行数据分析与整理。

2结果

2.1VEGF-C的表达

在早期食管癌组织中VEGF-C表达于癌细胞胞浆，呈散在的棕黄色颗粒状，阳性率为22.73%（5/22）。在进展期食管癌中，VEGF-C也表达在癌细胞胞浆，其表达明显增强，呈片状棕黄色颗粒状（封三图1），阳性率为67.86%（19/28），明显强于早期食管癌。同时，经χ2检验证实，VEGF-C的表达与患者的性别、年龄无明显关系（P＞0.05），与淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。在淋巴结转移组中，VEGF-C的表达高于无淋巴结转移组。见表1。

2.2Podoplanin的表达

在食管癌组织中，Podoplanin呈棕黄色线状阳性表达，其阳性表达的管道具有典型毛细淋巴管的形态学特征：由单层内皮细胞构成、管壁较薄、形态不规则，并可见内皮细胞核突向腔内，可以判定Podoplanin主要表达于淋巴管内皮细胞的细胞膜上，这些阳性表达的淋巴管多位于癌组织周边区的间质中（封三图2）。Podoplanin在微血管中未见阳性表达。我们在低倍镜下先选取早期食管癌组织和进展期食管癌组织中微脉管丰富的区域，然后在200倍视野下计数5个视野的Podoplanin标记为阳性淋巴管的数量，所有数据用均数±标准差（χ±s）表示，取均值作为微淋巴管密度（LMVD）。经统计学分析，进展期食管癌组织LMVD（5.92±1.04）明显高于早期食管癌组织（2.28±0.67），两者有统计学意义（P＜0.01）。

3讨论

恶性肿瘤的淋巴道转移是肿瘤转移的一种重要方式。VEGF-C作为VEGF家族的重要因子由Joukov[1]等率先报道，Furodoi等[2]应用免疫组化检测152例进展期大肠癌最深处组织的VEGF-C表达，多因素分析表明VEGF-C表达和淋巴结转移是影响5年生存率的独立因素。Jussila[3]认为VEGF-C表达的增多可引起淋巴管内皮细胞的异常分裂和增殖，从而诱导了癌周淋巴管的增生。Isaka等[4]将高表达VEGF-C的B16F10恶性黑色素瘤细胞接种到小鼠背部皮肤，发现瘤灶周边形成新生淋巴管。有研究认为，在食管癌临床病理因素中淋巴结转移与VEGF表达有显著关系[5]。本文将早期食管癌组织和进展期食管癌组织进行比较，发现两者VEGF-C阳性表达率有显著性差异，表明VEGF-C的表达随着食管癌的发生和进展逐渐增强。本文还发现有淋巴结转移的食管癌中VEGF-C的表达明显高于无淋巴结转移组，而淋巴道转移是食管癌转移的主要途径。因此，以上提示VEGF-C表达增强可能导致食管癌组织内淋巴管数量的增加，进而VEGF-C的高表达促进癌细胞的淋巴道转移。

Podoplanin是一种膜性粘蛋白，最初于肾小球足细胞表面被发现。牟江洪等[6]研究表明，大肠组织中Podoplanin与CD34没有交叉反应，证实两者分别具有极高的淋巴管和血管特异性；大肠癌边缘区域Podoplanin阳性的脉管密度与肿瘤的淋巴结转移和远处转移密切相关。周显礼等[7]认为Podoplanin可作为独立的癌淋巴管内皮特异性标记物使用。Veikkola等[8]研究发现VEGF-C能促进VEGFR-3过表达的内皮细胞的迁移，因此，VEGF-C也具有诱导淋巴管发生的作用。本研究中观察到Podoplanin主要表达食管癌组织周边区，阳性标记为棕黄色的管道，管壁较薄且不规则，其内无红细胞，单层内皮细胞核大且向腔内突出，这符合毛细淋巴管的典型形态特征。而Podoplanin表达阴性的管道管壁较厚且规则，呈圆形或椭圆形，内含大量红细胞，符合毛细血管的基本形态学特征。我们还观察到进展期食管癌组织周边微淋巴管密度明显高于早期食管癌组织，差异有显著性（P＜0.01），提示肿瘤边缘增多的淋巴管是癌细胞经淋巴道转移的主要通道。

综上所述，VEGF-C在食管癌转移过程中发挥重要作用，癌细胞产生的VEGF-C诱导肿瘤周边区淋巴管数量增加，为癌细胞的淋巴道转移提供必要条件。因此，寻找直接下调VEGF-C表达的方法来抑制肿瘤的淋巴系统转移，为肿瘤治疗提供了新的研究方向，因此Podoplanin可作为淋巴管的特异性标记物使用。

[参考文献]

[1] Joukov V，Pajusola K，Kaipainen A，et al. A novel vascularendothelial growth factor，VEGF-C，is a ligand for the Flt-4（VEGFR-3） and KDR（VEGFR-2） recepter tyrosine kinases[J]. ENBOJ，1996，15（2）：290-298.

[2] Furodoi A，Tanaka S，Haruma K，et al. Clinical significance of vascular endothelial growth factor C expression and angiogenesis at the deepest invasive site of advanced colorectal carcinoma[J]. Oncology，2002，62（2）：157-166.

[3] Jussila L， Alitalo K. Vascular growth factors and lymphangiogenesis[J]. Physiol Rev，2002，82（3）：673-700.

[4] Isaka N，Padera TP，Hagendoom J，et al. Peritumor lymphatics induced by vascular endothelial growth factor-C exhibit abnormal function[J]. Cancer Res，2004，64（13）：4400-4404.

[5] 赵毅波，庞霞，张红新，等. 食管癌组织中血管内皮生长因子的表达与临床意义[J]. 河南预防医学杂志，2005，5：257-258.

[6] 牟江洪，向德兵，肖华亮，等. 大肠癌VEGFR-3、podoplanin 和CD34 阳性脉管的特点及其与转移的关系[J]. 解放军医学杂志，2006，31（1）：64-66.

[7] 周显礼，李晓东，张卫东，等. 几种淋巴管特异性标记物在人癌组织中的表达[J]. 中国临床解剖学杂志，2006，24（2）：173-175.

[8] Veikkola T，Jussila L，Makinen T，et al. Signalling via vasealar endoshelial growst fuctor receptor-3 is sufficient for lym phangicgenesis in transgenic mice[J]. EMBO J，2001，20（6）：1223-1231.

（收稿日期：2009-01-14）