4种常用杀菌剂对江苏省番茄枯萎病菌的毒力

摘要：采用菌丝生长速率法测定了4种杀菌剂对36株番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum）的毒力。结果表明，不同杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力水平有显著差异，25%氰烯菌酯悬浮剂和50%多菌灵可湿性粉剂对菌落生长的抑制毒力最强，EC50分别为1.65 μg/mL和2.91 μg/mL；3%中生菌素可湿性粉剂的毒力次之，EC50为12.56 μg/mL；75%百菌清可湿性粉剂的毒力最小。不同地区的番茄枯萎病菌对4种杀菌剂的敏感性存在明显的差异，铜山地区的菌株除了对多菌灵、氰烯菌酯有较高的敏感性外，对其他2种杀菌剂都呈不同程度耐药性；沭阳地区的菌株对4种杀菌剂的敏感性均很强；姜堰地区的菌株对百菌清有较弱的敏感性，对其他3种杀菌剂的敏感性均较强。本研究为化学防治番茄枯萎病、科学合理用药提供参考依据。

关键词：杀菌剂；番茄枯萎病菌；尖孢镰刀菌；毒力测定

中图分类号：S 482.2文献标识码：BDOI：10.3969/j.issn.05291542.2016.01.039Toxicity of four common fungicides to tomato Fusarium

wilt in Jiangsu ProvinceYang Xiaoyun，Zhang Bin，Liu Youzhou，Chen Zhiyi（Institute of Plant Protection， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing210014，China）AbstractThe inhibitory activity of 4 fungicides against 36 Fusarium oxysporum， the pathogen of tomato Fusarium wilt， was investigated by mycelium growth rate method. The results showed that different fungicides have certain inhibition effects on the growth of F.oxysporum. 25% JS39919 SC and 50% carbendazim WP had the highest inhibitory activities， with the EC50 values of 1.65 μg/mL and 2.91 μg/mL， respectively， followed by 3% zhongshengmycin WP with EC50 value of 12.56 μg/mL， and 75% daconil WP was the weakest. Moreover， pathogens collected from different regions showed significant difference on the sensitivity to the four fungicides. The pathogens from Tongshan District were sensitive to carbendazim and JS39919 but fairly resistant to the other 2 fungicides. Pathogens from Shuyang District were highly sensitive to the 4 fungicides. Pathogens from Jiangyan District had low sensitivity to daconil， but very sensitive to the other 3 fungicides. This study provides an important theoretical and practical basis and reasonable selection of fungicides for the control of tomato Fusarium wilt.

Key wordsfungicides；tomato Fusarium wilt；Fusarium oxysporum；toxicity test番茄枯萎病（病原菌為尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum）是番茄生产中的主要土传病害，具有寄主范围广，防治困难的特点，一直是国内外研究的焦点和热点[13]。近年来，随着全国范围内设施番茄种植面积的扩大，番茄枯萎病已成为常见、易发和传播迅速的重要土传病害，严重影响了番茄的产量和品质。用于防治番茄枯萎病的方法有多种[46]，但在生产上主要以化学防治为主。为了减少菜农在用药时的盲目性，本文作者通过对江苏省设施番茄生产基地实地调查，选用了江苏省设施番茄土传病害常用的4种化学药剂，从江苏省徐州市铜山区、泰州市姜堰区、宿迁市沭阳县设施番茄种植基地采集土样，分离番茄枯萎病菌，测定了4种化学药剂对番茄枯萎病菌的毒力，分析了3个地区的番茄枯萎病菌对4种化学药剂的敏感性水平，为番茄生产上科学合理用药提供参考。

1材料与方法

1.1试验材料

36个供试病原菌菌株分别从江苏省3个地区的番茄示范基地（A.徐州市铜山区；B.泰州市姜堰区；C.宿迁市沭阳县）番茄枯萎病病株根围土壤中分离获得。大棚连续多年种植番茄，每年1茬，枯萎病发生较重。沭阳地区设施番茄采用水旱轮作的种植模式，春季夏季种植水稻，秋季冬季种植番茄，连续种植番茄3～4年后就换地，基本上不专门用药防治枯萎病；铜山地区在日光大棚中种植番茄，秋季冬季种植番茄，春季夏季种植其他蔬菜，枯萎病菌在土壤中存活年代久，数量大，每年使用大量化学农药进行多次防治。姜堰地区为大棚蔬菜示范新区，主要使用多菌灵防治番茄枯萎病，且用药量较大。每次取样在同一大棚进行，大棚面积667 m2，五点取样法取土样。

供试药剂：75%百菌清可湿性粉剂，广东中迅农业科技股份有限公司生产；3%中生菌素可湿性粉剂，福建凯立生物制品有限公司生产；50%多菌灵可湿性粉剂，上海沪联生物药业有限公司；25%氰烯菌酯悬浮剂，江苏省农药研究所股份有限公司生产。

42卷第1期杨晓云等：4种常用杀菌剂对江苏省番茄枯萎病菌的毒力2016供试选择性培养基：KH2PO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2S2O5 0.2 g，KCl 0.6 g，NH4NO3 0.5 g，蛋白胨5 g，蒸馏水1 000 mL，山梨糖10 g，蔗糖5 g，琼脂20 g，PCNB 620 mg，Oxgall 1 g，硫酸链霉素300 mg，盐酸金霉素75 mg。

PDA培养基：去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15 g，蒸馏水1 000 mL。

1.2试验方法

1.2.1病原菌的分离、检测及鉴定

根据文学等[7]的枯萎病菌分离方法获得病菌，在PDA培养基平板上进行纯化。于28℃培养4 d，观察菌落形态特征，大、小型分生孢子和厚垣孢子着生情况和形态特征。并依据Botha分类系统[8]和Nelson等[9]鉴定手册进行病原菌鉴定。

1.2.2含药培养基配制

每个供试药剂各设5～6个浓度（质量浓度），50%多菌灵可湿性粉剂浓度分别为0.3、1、2.5、5和10 μg/mL。75%百菌清可濕性粉剂浓度分别为1、3.3、10、33.3、100和333 μg/mL。3%中生菌素可湿性粉剂浓度分别为1、5、10、50和100 μg/mL。25%氰烯菌酯悬浮剂浓度分别为0.5、1、2、4和8 μg/mL。将4种试验药剂分别用溶剂配制成所需各浓度的10倍，取1 mL注入经消毒灭菌的、直径为6 cm的培养皿中，随后倒入9 mL冷却至约50℃的PDA培养基，摇匀后制成含药培养基。

1.2.3供试杀菌剂对番茄枯萎病菌的室内毒力测定方法菌饼的制备：将保存在试管斜面上的供试菌株转接于PDA平板上，28℃ 恒温培养箱中培养3 d，用直径5 mm的打孔器切取菌落外缘制备成菌饼，备用。

菌丝生长速率测定法[10]：将4种杀菌剂分别制成不同浓度的含药PDA培养基平板，设置不加药剂的对照，每个浓度重复3次。在每个平板中央接入一块直径为5 mm的菌饼。28℃培养箱中培养72 h。采用十字交叉法测量菌落直径，以平均值代表菌落大小，根据以下公式计算各药剂浓度对菌丝生长的抑制率。所得数据经Finney几率分析法和DPS统计软件进行数据处理，求出各单剂毒力回归方程、EC50及相关系数（r）[11]。

抑菌率计算公式如下：抑菌率（%）=

对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径-菌饼直径×100。2结果与分析

2.136个番茄枯萎病菌的分离和鉴定

在江苏铜山、姜堰、沭阳3个基地采集土壤，使用选择性培养基分离枯萎病菌。分离获得36株病原菌，有2种菌落形态（图1）。

图1两种类型菌株的培养性状

Fig.1Colony morphology of two types of strains类型Ⅰ菌落初为粉色，菌丝茂密，菌落中心略有皱缩凸起，5～6 d时菌落变为玫瑰红色，8～10 d后菌落颜色为暗紫色；类型Ⅱ菌落初为白色，菌丝绒状，略带粉状，菌落中心略有凸起，后变为浅紫色，菌落底浅肉色。初步鉴定菌株属于尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。

在PDA培养基上培养96 h后，菌落平均直径为48.9 mm，菌株间有差异，气生菌丝绒状、毡状，白色或粉色，菌落背面常带有紫色或红色色素（图1）。镜检发现，可观察到3种分生孢子，分别为：（1）小型分生孢子，较多，卵形或椭圆形，假头状着生于产孢细胞上。（2）大型分生孢子“美丽型”，较匀称，基细胞足跟明显，多数为3个隔膜。（3）厚垣孢子球形，顶生、间生或串生。产孢细胞较短，单瓶梗，单生或具分支（图2）。根据菌落形态和镜检特征，将分离得到类型I、类型Ⅱ的菌株初步鉴定为尖孢镰刀菌。

ITS序列分析：利用真菌通用引物（ITS1和ITS4）对形态学初步确定的36个代表菌株进行 PCR扩增。序列分析结果显示，36株菌株的ITS序列相似性≥98%，且与尖孢镰刀菌亲缘关系最近（相似性≥99%），结合其形态学特征，可确定供试36个菌株均为尖孢镰刀菌，其中，类型I有22个菌株，类型Ⅱ有14个菌株。

图2尖孢镰刀菌的产孢细胞（a）和分生孢子（b）形态

Fig.2Conidiogenous cells （a）and conidia （b） of

Fusarium oxysporum

2.24种杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力测定结果

通过室内测定4种杀菌剂对36株番茄枯萎病菌菌丝生长速率抑制作用结果可知，不同杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力水平有显著差异。75%百菌清可湿性粉剂的毒力较弱，平均EC50为（55.140±5.711） μg/mL，3%中生菌素可湿性粉剂的毒力次之，平均EC50为（12.560±0.199） μg/mL；50%多菌灵可湿性粉剂和25%氰烯菌酯悬浮剂的毒力较强，平均EC50分别为（2.908±0.086） μg/mL和（1.652±0.173） μg/mL。

75%百菌清可湿性粉剂对沭阳菌株的毒力最强，EC50范围0.36～61.44 μg/mL，对姜堰菌株的毒力次之，EC50范围22.01～95.34 μg/mL，对铜山菌株的毒力最弱，EC50范围1.52～246.61 μg/mL（表1～2）。表175%百菌清可湿性粉剂对番茄枯萎病菌的室内毒力测定结果

50%多菌灵可湿性粉剂对铜山菌株的毒力最强，EC50范围1.66～3.31 μg/mL，对姜堰菌株的毒力次之，EC50范围1.84～3.93 μg/mL，对沭阳地区菌株的毒力最弱，EC50范围2.05～4.38 μg/mL（表5～6）。

25%氰烯菌酯悬浮剂对姜堰菌株的毒力最强，EC50范围0.01～3.66 μg/mL，对沭阳菌株的次之，EC50范围0.05～3.57 μg/mL，对铜山菌株的毒力最弱，EC50范围0.05～4.69 μg/mL（表7～8）。

比较4种杀菌剂对来自3个地区的36个番茄枯萎病菌的毒力水平，结果表明，不同地区的番茄枯萎病菌对4种杀菌剂的敏感性存在明显的差异。铜山地区的菌株，除了50%多菌灵可湿性粉剂，对其他3种杀菌剂的敏感性都很弱；沭阳地区的菌株对4种杀菌剂的敏感性均很强；姜堰地区的菌株对75%百菌清可湿性粉剂有较弱的敏感性，对其他3种杀菌剂的敏感性较强。表550%多菌灵可湿性粉剂对番茄根际镰刀菌群的室内毒力测定结果

3讨论

随着设施番茄连续种植年代的增加，由枯萎病菌引起的土传病害导致的连作障碍日趋严重，现已成为设施番茄安全生产的主要瓶颈[12]。目前生产上防治番茄枯萎病主要依靠化学农药。我们通过实地调查和试验结果分析发现，不同地区的枯萎病菌菌株对化学农药的敏感性存在显著差异，这与当地设施番茄的种植模式和用药水平有密切关系，例如与其他两个地区的菌株相比，沭阳地区的枯萎病菌几乎对所有的化学农药都比较敏感，其原因之一是沭阳地区设施番茄采用水旱轮作的种植模式，春季夏季种植水稻，秋季冬季种植番茄，连续种植番茄3～4年后就换地，所以基本上不用药防治枯萎病；铜山地区的枯萎病菌对化学农药的敏感性较弱，主要原因是铜山地区在日光大棚中种植番茄，秋季冬季种植番茄，春季夏季种植其他蔬菜，枯萎病菌在土壤中存活年代久，数量大，每年必须使用大量化学农药进行多次防治。因此，在制定设施番茄枯萎病综合防控对策时，我们要了解当地番茄种植模式和防治枯萎病的用药水平，以便能够初步估算出枯萎病菌对化学农药的敏感性，做到适时适量用药，达到经济、有效地防控设施番茄枯萎病的目的。

从本试验结果可看出，化学药剂50%多菌灵可湿性粉剂和25%氰烯菌酯悬浮剂对番茄枯萎病菌表现出较好的抑菌活性，平均EC50分别为2.91 μg/mL和1.65 μg/mL，但是我们通过设施番茄生产基地实地调查发现，多菌灵和氰烯菌酯对番茄枯萎病的防治效果并不十分理想，分析主要原因是这两种化学药剂的残效期太短，无法全面防控枯萎病菌的侵害。番茄枯萎病菌长期存活在土壤中，通过番茄植株的根部伤口侵染到植株体内繁殖，因此需要在苗期定植时用药处理土壤，阻止病原菌侵入番茄植株内；多菌灵和氰烯菌酯的残效期一般为7～10 d，必须大量、连续地使用药剂才能达到较好的防控效果，而在番茄生产基地一般只在移苗定植前一次性用药处理土壤，两种化学药剂的残效期又短，致使达不到很好的防控效果。另外，大量、多次使用化学药剂处理土壤会造成环境污染，并且增加农民生产成本。

由此可见，使用化学防治技术控制设施番茄枯萎病并不是最佳选择。解决病原菌抗药性的有效途径，可以采用替代药剂（生防菌剂）以及与不同作用靶标的其他药剂混用或复配等。本实验室以番茄枯萎病菌为指示菌，定向分离和筛选了对病原菌有较好拮抗作用的生防菌芽胞杆菌B1619，通过田间试验表明，B1619不仅可有效控制设施番茄枯萎病，而且对番茄植株有一定促生作用[1314]。使用生物防治技术控制设施番茄枯萎病，将减少化学农药造成的环境污染，并且可以修复生态环境，是一种具有应用前景的防控技术，有待今后深入研发和推广应用。

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（责任编辑：王音）